The effects of xanthan gum on equine sperm quality during cooling storage / Efeitos de xantam gum em qualidade de esperma equino durante armazenamento resfriado

This study was designed to evaluate the possible benefits of adding xanthan gum to a standard extender for equine through in vitro analyzes of sperm quality. Semen was collected four times from five different stallions (n= 20 samples) and subjected to cooled storage under different conditions: control (only standard extender) and three different concentrations of xanthan gum (0.01%, 0.12%, and 0.25%) supplemented to the extenders. Sperm parameters, such as motility, mitochondrial functionality, and membrane, acrosome, and DNA integrity were measured after 0h, 24h, 48h, and 72h of sperm storage at 5ºC. Our observations indicated that sperm motility declined with longer cooling period with the 0.25% xanthan gum supplementation group compared with the control group. Other parameters, such as mitochondrial functionality and membrane and acrosome integrity also declined for all treatments during storage; however, no differences were observed between xanthan gum and control groups. DNA integrity did not significantly change during the storage. In conclusion, the addition of xanthan gum to equine semen extender is not harmful to the sperm structure, despite reducing the sperm motility.(AU)

Esse estudo foi desenvolvido para avaliar os possíveis benefícios de acrescentar xanthan gum a um extensor padrão através de analises in vitro de qualidade de esperma. Semen foi coletado quatro vezes de cinco garanhões diferentes (n = 20 amostras) e submetido a armazenamen to resfriado em diferentes condições: controle (apenas extensor padrão) e três diferentes concentrações de xanthan gum (0,01%, 0,12% e 0,25%) suplementado aos extensores. Parâmetros dos espermatozoides, como mobilidade, funcionamento mitocondrial e integridade de membranas, acrossomos e DNA forma medidos após 0h, 24h, 48h e 72h de armazenamento a 5oC. Nossas observações indicaram que motilidade reduziu com armazenamento resfriado prolongado no grupo de 0,25% de suplementação de xanthan gum comparado ao grupo controle. Outros parâmetros, como funcionalidade mitocondrial e integridade de membrana e acrossomos também reduziu em todos os tratamentos durante o armazenamento, no entanto não foram detectadas diferenças significativas entre grupos tratados e grupo controle. Integridade de DNA não mudou significativamente durante armazenamento. Em conclusão, a adição de xanthan gum a extensor de sêmen equino não é danosa à estrutura do espermatozoide apesar de reduzir motilidade.(AU)

Cryopreservation of boar semen in 0. 5 mL straws at low spermatozoa concentration is better than high concentration to maintain sperm viability / A manutenção da viabilidade do sêmen suíno criopreservado em palhetas de 0, 5 mL em baixas concentrações espermáticas é melhor do que em altas concentrações

To date, no studies have been performed evaluating the effect of boar spermatozoa concentration in 0.5mL freezing straws, leading us to examine this question. Each sperm-rich fraction of the ejaculate (n=25) was diluted at five different sperm concentrations (100, 200, 300, 600 and 800 x 106 spermatozoa/mL), packaged in 0.5mL straws, and subsequently frozen. After thawing, the sperm from all of treatment groups were analyzed to determine motility characteristics using a sperm class analyzer (SCA-CASA), and their plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, sperm membrane lipid peroxidation and fluidity were analyzed by flow cytometry. An increase in spermatozoa concentration above 300x106 spermatozoa/mL in a 0.5mL straw impaired (p<0.05) the total and progressive motility, curvilinear velocity, straight-line velocity, linearity and beat cross frequency. However, the plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, membrane lipid peroxidation and fluidity were not influenced (p>0.05) by high spermatozoa concentrations at freezing. Therefore, to increase spermatozoa survival and total and progressive motility after thawing, boar spermatozoa should be frozen at concentrations up to 300x106 spermatozoa/mL.(AU)

Até o momento, não foram realizados estudos que avaliassem o efeito da concentração de espermatozoides/mL em palhetas (0,5mL) para a criopreservação, levando-nos a analisar esta questão. Cada fração-rica do ejaculado (n=25) foi diluída em cinco diferentes concentrações de espermatozoides (100, 200, 300, 600 e 800x106 espermatozoides/mL), envasadas em palhetas de 0,5mL e posteriormente congeladas. Após a descongelação, os espermatozoides de todos os tratamentos foram avaliados a fim de determinar as características de motilidade usando um sistema de análise computadorizada dos espermatozoides (SCA-CASA). A integridade das membranas plasmática e acrosomal, o potencial de membrana mitocondrial, a peroxidação lipídica e a fluidez da membrana foram analisadas por citometria de fluxo. O aumento na concentração de espermatozoides acima de 300x106 espermatozoides/mL diminuiu (p<0,05) a motilidade total e progressiva, velocidade curvilínea, velocidade linear, linearidade e frequência de batimento. No entanto, a integridade da membrana plasmática e acrosomal, potencial de membrana mitocondrial, peroxidação lipídica e fluidez de membrana não foram influenciados (p>0,05) por altas concentrações de espermatozoides durante a criopreservação. Portanto, a fim de melhorar a sobrevivência dos espermatozoides suínos e a motilidade total e progressiva após a descongelação, os espermatozoides suínos devem ser congelados a concentrações não superiores a 300x106 espermatozoides/mL.(AU)

Decline in semen quality among infertile men in Brazil during the past 10 years

ABSTRACTPurpose:To investigate whether the semen quality of men undergoing conventional semen analysis is deteriorating over time.Materials and Methods:We analyzed and compared the sperm count, motility and morphology of 2300 semen samples provided by males undergoing conventional seminal analysis, from years 2000 to 2002 and 2010 to 2012. The incidences of severe oligozoospermia and azoospermia over time were also compared.Results:A total of 764 sperm samples were analyzed in 2000-2002 and 1536 in 20102012. Over time, the mean sperm concentration/ml decreased significantly from 61.7 million in 2000-2002 to 26.7 million in 2010-2012 (R2=11.4%, p<0.001), the total sperm concentration decreased significantly from 183.0 million to 82.8 million (R2=11.3%, p<0.001), and the percentage of normal forms decreased significantly from 4.6% to 2.7% (R2=9.8%, p<0.001). The incidence of severe oligozoospermia significantly increased from 15.7% to 30.3% (OR: 1.09, p<0.001) and the incidence of azoospermia increased from 4.9% to 8.5% (OR: 1.06, p=0.001).Conclusions:This study demonstrated a significant time-related decline in semen quality of infertile patients. This finding might have implications on fertility and emphasizes the need for further studies addressing subject's life-style in order to find and reduce the causative agents. Future prospective and multicenter studies including representative samples of the general population are needed to confirm whether semen quality is really declining.

Avaliação de dieta formulada com subprodutos de mandioca na produção de sêmen de coelhos / Evaluation of diet formulated with cassava by-products in the rabbit semen production

Avaliaram-se as características quantitativas e qualitativas do sêmen de coelhos alimentados com uma ração referência e outra ração formulada com 79,83% de subprodutos de mandioca. Utilizaram-se 20 reprodutores da raça Nova Zelândia Branco, com idade média inicial de sete meses, alojados individualmente em gaiolas e distribuídos em delineamento experimental inteiramente ao acaso, com duas dietas e dez repetições. Realizaram-se dez colheitas de sêmen por animal durante seis meses. Avaliaram-se o volume de sêmen sem gel e volume de gel, cor do sêmen, pH, motilidade espermática progressiva, vigor espermático, concentração espermática, número de espermatozoides no ejaculado, espermatozoides normais, anormais e anormalidades primárias e secundárias. O volume de sêmen sem gel, o índice de normalidade, as anormalidades primárias e secundárias foram iguais (P>0,05) para os animais alimentados com a ração referência e a com subprodutos de mandioca. Os demais parâmetros do sêmen foram melhores (P<0,05) nos animais tratados com a ração com subprodutos de mandioca. Os resultados das características quali-quantitativas do sêmen dos coelhos da Raça Nova Zelândia Branco demonstram que é possível utilizar ração com 79,83% do volume da formulação com subprodutos de mandioca, na dieta de reprodutores, sem prejuízos nas características do sêmen, desde que observados os níveis reduzidos de taninos e ácido cianídrico.

The quantitative and qualitative rabbit semen characteristics fed with a reference diet and a diet formulated with 79.83% of cassava by-products were evaluated. 20 New Zealand White rabbit bucks, with initial average age of seven months were used, individually allocated and distributed in a completely ramdomized design, with two diets (treatments) and ten replications. The ten semen collections per animal were taken during six months. The evaluated parameters were: semen volume without gel and gel volume, color of semen, pH, spermatic progressive motility, spermatic vigor, spermatic concentration, spermatozoa number in the ejaculation, normal spermatozoa, abnormal and primary and secondary abnormalities spermatozoa. The semen volume without gel, the normal spermatozoa, primary and secondary abnormalities spermatozoa were similar (P>0.05) to the animals fed with cassava by-products diet and reference diet. Other semen parameters were better (P<0.05) in the animals fed with the cassava by-products diet. The results of the quali-quantitative characteristics of the semen from New Zealand White rabbits showed that it is possible to use diets containing 79.83% of inclusion of cassava by-products in the diet of rabbit bucks, without affecting semen characteristics, since we observed the reduced level of tannins and hydrocyanic acid.

Evaluación y estandarización de la calidad del espermiograma: nuevos límites inferiores de referencia / Evaluation and standardization of the quality of semen: new lower reference limit

El análisis seminal o espermiograma es uno de los parámetros más usados en la evaluación de la fertilidad masculina. La OMS (WHO, 2010), presentó el 5 Manual para el examen y procesamiento del semen humano, documento que fue analizado durante el primer taller de estandarización del análisis seminal (PLEAS), realizado en Santiago de Chile, mayo del 2010. Posteriormente se aplicaron los nuevos valores indicados como "límite de referencia inferior" (LIR), en el estudio del análisis seminal realizados por varios autores (2003 al 2010). Los resultados obtenidos indican que el 81 por ciento de los investigadores latino americanos creen que el nuevo manual estandariza mejor la concentración espermática, un 96 por ciento está de acuerdo con la nueva subclasificación en la motilidad espermática en progresiva (A), no progresiva (B) e inmóviles (C). El 68 por ciento estima que el mejor instrumental de recuento es la cámara de Neubauer. Respecto a los controles de calidad solo el 18 por ciento realiza controles de calidad externa. El 100 por ciento de los investigadores estima conveniente realizar continuos talleres de estandarización. Respecto a la aplicación de los LIR en las poblaciones en estudio, todos ellos cumplirían con los estándares actuales para ser considerada una población con capacidad de fertilidad. Sin embargo varios autores opinan que una nueva versión del manual OMS, debe realizarse urgentemente para estandarizar mejor la concentración espermática (15 millones por mL) y la morfología según criterios estrictos (4 por ciento), valores de referencia que consideran muy bajos.

Spermogram or semen analysis is one of the most used parameters in the evaluation of male fertility. WHO (2010) presented the 5th Manual for review and processing of human semen, a document that was discussed during the first workshop of standardization of semen analysis (PLEAS), held in Santiago de Chile, May 2010. Subsequently applied the new values expressed in "lower referencelimit" (LRL) for semen in several analysis studies conducted by various authors (2003 to 2010). The results indicate that 81 percent of Latin American researchers believe the new manual standardizes best sperm concentration, 96 percent agree with the new subclassification in progressive sperm motility (A), non-progressive (B) and immobile (C). 68 percent determined that the best instruments for the sperm countis the Neubauer haemocytometerchamber. Regarding quality control only 18 percent performed external quality control. 100 percent of researchers believe it is appropriate to conducton going standardization workshops. Regarding the application of LRL in the study populations (2003-2010), 100 percent comply with the standards to be considered a population with fertility capacity. However, several authors argue that a new version of the WHO manual, must be re-done urgently to better standardize sperm concentration (15 million/mL) and morphology according to strict criteria (4 percent), reference values considered very low.